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(免疫印记法)常识问答
版块:产品百科   类型:普通   作者:ningxueqin   查看:713   回复:0   获赞:0   时间:2022-03-23 20:55:56
 1) 为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白?

  答:印迹法原因有很多,1 你的细胞中不表达这种蛋白质,换一种细胞;2 你的细胞中的蛋白质被降解掉了,你必需加入PMST,抑制蛋白酶活性;3 你的抗体不能识别目标蛋白,多看看说明,看是否有问题。

  2)我的细胞提取液有的有沉淀,有的很清亮,为什么呢?

  答:1 有沉淀可能是因为你的蛋白没有变性完全,可以适当提高SDS 浓度,同时将样品煮沸时间延长,2 也不排除你的抗原浓度过高,这时再加入适量sample buffer即可。

  3)我做的蛋白质分子量很小(10KD),请问怎么做WB?

  答:可以选择PSQ 膜,同时缩短转移时间。也可以将两张膜叠在一起,再转移。其

  他按步骤即可。

  4)我的目的带很弱,怎么加强?

  答:可以加大抗原上样量。这是最主要的。同时也可以将一抗稀释比例降低。

  实验方法互助区——蛋白区

  5)胶片背景很脏,有什么解决方法?

  答:减少抗原上样量,降低一抗浓度,改变一抗孵育时间,牛奶浓度提高。

  6)目标带是空白,周围有背景,是为什么?

  答:你的一抗浓度较高,二抗上HRP 催化活力太强,同时你的显色底物处于一个临界点,反应时间不长,将周围底物催化完,形成了空白。将一抗和二抗浓度降低,或更换新底物。

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