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β乳球蛋白，mRNA临床申报β-Lg ELISA Kit检测范围

版块：产品百科类型：普通作者：ningxueqin 查看：17 回复：0 获赞：0 时间：2024-04-17 16:47:30

　mRNA临床申报本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中牛β乳球蛋白（β-Lg）的含量。
　　l 有效期：6个月
　　l 保存条件：2-8℃
　　l 本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断
　　实验原理
　　试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被牛β乳球蛋白（β-Lg）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛β乳球蛋白（β-Lg）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
　　样本处理及要求
　　1.  血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于2000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
　　2.  血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 2000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
　　3.  细胞培养物上清或其它生物标本：2000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
　　注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
　　备注：
　　1.  标准品浓度依次为：200、100、50、25、12.5、0 μg/mL
　　2.  经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过zui大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
　　注意事项
　　严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
　　洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
　　消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
　　底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
　　避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
　　在储存和温育时避免强光直接照射。
　　平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
　　任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
　　不能使用过期产品。
　　如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
　　试剂准备
　　试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
　　20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
　　操作步骤
　　从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
　　设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
　　样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
　　除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
　　弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
　　每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
　　每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
　　实验结果计算
　　以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

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