灌流细胞培养植物查尔酮异构酶（CHI）ELISA试剂盒性能-产品百科-seo学途外链网

灌流细胞培养植物查尔酮异构酶（CHI）ELISA试剂盒性能

版块：产品百科类型：普通作者：ningxueqin 查看：13 回复：0 获赞：0 时间：2024-04-18 21:21:56

　　灌流细胞培养实验原理
　　试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被植物查尔酮异构酶（CHI）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物查尔酮异构酶（CHI）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
　　操作步骤
　　从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
　　设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
　　样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
　　除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
　　弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
　　每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
　　每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
　　实验结果计算
　　以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
　　试剂盒性能
　　检测范围：10 U/ml–320 U/ml。
　　灵敏度：zui低检测浓度小于1.0 U/ml。
　　特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
　　重复性：板内变异系数小于10%，板间变异系数小于15%。

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