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将尼龙膜漂浮在去离子水表面直至滤膜从下往上全部湿透
版块:产品百科   类型:普通   作者:ningxueqin   查看:401   回复:0   获赞:0   时间:2022-03-14 19:54:49
  尼龙膜(0.01mo/L NaOH, 3mol/L NaCI)适于将RNA转移至带正电荷的尼龙膜,而20X ssC中性缓冲液适于将RNA转移至不带电荷的尼龙膜。

  5.用新的解剖刀或切纸刀裁一张长宽均大于胶1mm的尼龙膜。按触膜时应戴上手套或用平头镊子(如Mllipore镊子),因为油腻的手接触过的尼龙膜不易没湿。

  6.将尼龙膜漂浮在去离子水表面直至滤膜从下往上全部湿透,然后将膜浸入10XSSC中至少5min,用干净的解剖刀片切去滤膜一角,使其与凝胶的切角相对应。

  不同批号的尼龙膜其浸湿速率不同,若膜在水面上漂浮几分钟仍未湿透,直接换一张新的膜, 因为未完全浸湿的膜用于RNA转移是不可靠的。转移系统的安装和RNA的转移(参见图6-6)

  7.小心将胶倒转后置于平台上滤纸的中央。确保厚滤纸和胶之间没有气泡滞留。

  8.用塑料保鲜膜或封口膜围绕凝胶周边,但不是覆盖凝胶。以此形成的屏障可阻止液体自缓冲液槽直接流至凝胶上方的纸巾层,若纸巾堆放不整齐,就容易从凝胶的边缘垂下并与支持平台接触,造成的短路是导致RNA由凝胶向膜转移效率下降的主要原因。

  9.用转移缓冲液浸湿胶(见步骤4),在凝胶上方放置湿润的尼龙膜,并使两者的切角相重叠,滤膜的一-条边缘应刚好超过凝胶上部加样孔线的边缘。

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