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最近由于带电荷的尼龙膜的出现,电转移法又焕发了生机
版块:产品百科   类型:普通   作者:ningxueqin   查看:464   回复:0   获赞:0   时间:2022-03-15 20:02:26
  同时向两张膜转移在同时向两张膜转移的方法中,当靶DNA浓度较高时(如克隆DNA限制性内切核酸酶消化产物),利用毛细管法可将DNA同时并快捷地从一块凝胶转移到两张尼龙膜或硝酸纤维素膜上。

  尼龙膜转移缓冲液唯一的来源是凝胶自身含有的液体,因此转移效率相对较差。如果实验需要较高的灵敏度( 如检测哺乳类动物DNA中的单拷贝序列),不推荐使用这种方法;但是如果是对质粒、噬菌体、黏性质粒或简单的有机体( 如酿酒酵母和果蝇)的基因组进行Southern杂交分析,则足够了。

  实际上,只有少数采用这种方法转移的哺乳类动物基因组DNA能够用常规的信号检测方法实现检测。

  电转移

  电转移不适用于使用硝酸纤维素滤膜作为固相支持物,因为核酸结合到这种滤膜上所要求缓冲液的离子强度要高。这些缓冲液传导电流的效率极高,必须采用大体积来保证该电泳缓冲液系统的缓冲容量不会因电解而耗尽。

  另外,需要充分的外冷却来克服欧姆热。最近由于带电荷的尼龙膜的出现,电转移法又焕发了生机。

  这种方法被应用于经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的小分子DNA片段的Southern 杂交( Sellwag and Dahlberg 1980;Church and Gilbert 1984)。

  在离子强度极低的缓冲液中,小至50bp的核酸也可以结合到这些带电荷的尼龙膜上( Reed and Mann 1985)。虽然单链DNA和RNA可以直接转移,但双链DNA片段必须先经过如方案11所述的原位变性

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